新生兒溶血病的診斷除應注意產婦的妊娠史，分娩史、輸血史及健在子女的血型和健康狀況外，無論對診斷與治療實驗室診斷都是非常重要的。
1.確診患嬰的依據：
（1）紅細胞直接抗球蛋白試驗陽性：從患兒紅細胞上直接查到了被吸附的抗體，證明紅細胞已經受累。本試驗為直接證據。
（2）從紅細胞上釋放了具有血型特異性的抗體：①用熱釋放法檢查ab0血型不合嬰兒的紅細胞是否釋放了抗a，抗b，抗a、b抗體或ab0血型系統以外的抗體。②用乙醚釋放法檢查rh血型不合的嬰兒紅細胞是否釋放了抗d、抗c或抗e抗體。本試驗也為直接證據。
（3）血清中存在與患嬰紅細胞上抗原相對應的游離抗體。
2.輔助診斷依據：
（1）高膽紅素血癥：出生時臍血膽紅素超過85.8mol／l。（50mg／l），24h血清膽紅素超過102.6fmol／l。（60mg／l），且以未結合膽紅素為主。
（2）孕母血清內查到與胎兒紅細胞不相合的完全抗體。
3.產前試驗：
如懷疑有hdn可能時，最好在產前開始檢查，以期及早診斷及采取適當的預防與治療措施。
（1）血清學檢查：首先要對孕婦做ab0血型系統及rh系統的d抗原檢查及不規則抗體篩選，所有篩選出陽性抗體都要區別是igg或igm，并應進一步做抗體鑒定分析，以確定是否會引起hdn.因為抗體的存在并不一定都會發生。
（2）羊水分析：有必要時，并且在有條件的情況下可以做子宮穿刺抽取羊水進行分析，檢查胎兒血型物質，確定胎兒血型。在450 nm處測定膽紅素含量的吸光度值，吸光度值越高表示官內溶血越嚴重。（實習編輯：大北）
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